
當(dāng)前有多種技術(shù)可用于體外分子互作檢測,每種技術(shù)都存在特定的優(yōu)勢和不足之處,因此,對于特定的分子互作檢測,如何選擇更加合適的技術(shù),是廣大科研人員面臨的一種挑戰(zhàn)。目前諸多方法中,歸納起來,可以分為微流控表面結(jié)合法(例如表面等離子共振技術(shù)(SPR)或switchSENSE技術(shù))或溶液中檢測法(比如等溫滴定熱分析(ITC)或微尺度熱泳分析(MST))。溶液中檢測法在樣本制備方面存在優(yōu)勢,同時不需要分子固定步驟,操作上更加簡便;而以分子固定為基礎(chǔ)的方法,對樣本的需求量較少,能夠提供底物分子與配體分子解離方
iPSC是非常脆弱敏感的細胞,傳統(tǒng)流式分選中的機械應(yīng)力會通過激活與細胞應(yīng)激或分化相關(guān)的基因掩蓋或改變scRNA-seq結(jié)果。因此,在分選細胞時盡量減少機械應(yīng)力是很重要的。此外,在cDNA產(chǎn)生和文庫制備之前減少死細胞和碎片,可以提高cDNA文庫的質(zhì)量。熒光激活細胞分選是用于富集特定細胞群同時避免死細胞和碎片的常用技術(shù)。然而,使用高壓噴嘴液滴分選的傳統(tǒng)細胞分選方法會對細胞產(chǎn)生機械剪切應(yīng)力;誘導(dǎo)基因表達變化和/或RNA降解。
在細胞生物學(xué)和藥物研發(fā)中,傳統(tǒng)研究流程需在微孔板、離心管、PCR板等多平臺間轉(zhuǎn)移樣本,導(dǎo)致實驗變異大(跨平臺誤差>20%)、核酸損失高(低細胞數(shù)樣本回收率<50%)。例如,基因表達分析需多次轉(zhuǎn)移樣本,單細胞核酸損失率高達70%。本篇文章中德國卡爾斯魯厄理工學(xué)院團隊開發(fā)的“Cells-to-cDNAonChip”技術(shù),通過液滴微陣列(DMA)平臺與I.DOT非接觸式納升級分配技術(shù)的結(jié)合,首次實現(xiàn)從活細胞培養(yǎng)到cDNA合成的全流程納升級集成,將試劑消耗降低至傳統(tǒng)方法的1/100,操作時間縮短33%。
非自然的堿基對(UBP)增強了人造核酸的化學(xué)多樣性,因此可以通過體外選擇來產(chǎn)生新的適體和催化核酸。但是,由于缺乏方法,UBPS的逆轉(zhuǎn)錄是RNA適體選擇的關(guān)鍵步驟,尚未充分表征。研究者提出了一系列多功能測定法,以對疏水性非天然堿基對的代表——TPT3:NAM堿基對的逆轉(zhuǎn)錄為研究方向。在RNA的體外進化中確定了四種不同的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)的UBP的保真度。在RNA在體外篩選過程中,使用新型的基于點擊化學(xué)的電動性轉(zhuǎn)移測定法研究了TPT3:NAM對的保留。對逆轉(zhuǎn)錄動力學(xué)的實時監(jiān)測顯示,處理TPT3:NAM
Ugi反應(yīng)(烏吉反應(yīng)),是指一分子醛或酮、一分子胺、一分子異腈以及一分子羧酸縮合生成α-酰氨基酰胺的多組分反應(yīng)。反應(yīng)由德國化學(xué)家 Ivar Karl Ugi 于1959 年首先報道。加速合成化學(xué)并將其微型化是制藥、農(nóng)用化學(xué)和材料研究與開發(fā)的一個新興領(lǐng)域。在此,我們介紹了在Ugi-3-成分反應(yīng)中使用手性谷氨醇、氧代成分(酮)和異腈結(jié)構(gòu)單元合成亞氨吡咯-2-酸衍生物。我們使用I-DOT(一種基于正壓的納升級非接觸式分液技術(shù))以全自動化方式制備了1000多種不同的衍生物。該反應(yīng)產(chǎn)率良好,并且耐受多種功
在達到商業(yè)制造階段之前,治療性抗體的發(fā)現(xiàn)和開發(fā)過程可以持續(xù)10年以上。從發(fā)現(xiàn)階段過渡到臨床前表征和制造需要開發(fā)穩(wěn)定、高產(chǎn)的單克隆細胞系。使用傳統(tǒng)技術(shù)(例如有限稀釋)分離單個產(chǎn)生抗體的克隆非常耗時,而且浪費耗材和試劑,會產(chǎn)生41%?77%的空孔,而剩余的孔中也只有25%?43%能夠長成單克隆。細胞打印機可以改善低分配效率,但是,它們?nèi)匀蝗狈_分選產(chǎn)生蛋白質(zhì)的活靶細胞的能力。
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