圖1評估TPT3：NAM堿基對的逆轉(zhuǎn)錄的實驗流程示意圖。帶有非天然核苷酸rTPT3或rNAM的RNA對具有不同的逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄。用不同的方法分析了逆轉(zhuǎn)錄的加工性（請參閱上圖，逆時針）：通過PAGE檢測全長與截短的cDNA比率，通過LC-MS和Sanger測序檢測LC-MS融合cDNA，使用switchSENSE^®技術(shù)及模擬SELEX循環(huán)的動力學測量，以探索UB保留周期數(shù)。

特別的，在本研究中（見圖2）利用switchSENSE^®技術(shù)及heliX+設備對逆轉(zhuǎn)錄過程進行實時監(jiān)測，使得MMLV和SSIV RT與RNA模板的結(jié)合和活性的動力學得以表征。

本研究通過在switchSENSE^®芯片上構(gòu)建檢測體系，實現(xiàn)了對UBP摻入的動態(tài)量化測量。因此switchSENSE^®是研究其他逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶活性強有力的技術(shù)手段。

圖2 switchSENSE^®生物芯片上的MMLV和SS IV RT活性測定流程示意圖。（A）芯片測試示意圖。首先，配體通過雜交固定在單個鏈錨定（1）。隨后，將RT與芯片核酸結(jié)合（2），然后注射dNTPS或DNTPS + dNaM TP以啟動逆轉(zhuǎn)錄（3）。最后，芯片被再生（4）。（B）在存在或不存在不同模板的dNaM TP的情況下，每個MMLV和SS IV RT的相對振幅，包括其標準偏差（N≥3），這些偏差來自延伸幅度的熒光變化。將48-1XRTPT3、48-2XRTPT3和24-NT RNA的值標準化為48-NT未修飾的RNA。（C）在結(jié)合階段，MMLV的熒光變化信號。（D）在不同dNTP濃度下逆轉(zhuǎn)錄（伸長）期間熒光變化的增加。（E）在底物濃度上繪制觀察到的速率以獲得催化速率圖 Kcat。