在達(dá)到商業(yè)制造階段之前,治療性抗體的發(fā)現(xiàn)和開發(fā)過程可以持續(xù)10年以上。從發(fā)現(xiàn)階段過渡到臨床前表征和制造需要開發(fā)穩(wěn)定、高產(chǎn)的單克隆細(xì)胞系。使用傳統(tǒng)技術(shù)(例如有限稀釋)分離單個產(chǎn)生抗體的克隆非常耗時,而且浪費耗材和試劑,會產(chǎn)生41%?77%的空孔,而剩余的孔中也只有25%?43%能夠長成單克隆。細(xì)胞打印機(jī)可以改善低分配效率,但是,它們?nèi)匀蝗狈_分選產(chǎn)生蛋白質(zhì)的活靶細(xì)胞的能力。
WOLF單細(xì)胞柔性分選系統(tǒng)能夠基于散射光和熒光標(biāo)記分析和分選單個細(xì)胞,這些標(biāo)記指示了蛋白質(zhì)或特異性抗體的分泌和活力。與WOLF配合使用的N1單細(xì)胞分配器可以將單細(xì)胞打入96孔或384孔板中,分選效率高于90%。專利微流控低壓(<2 psi)分選技術(shù)確保了溫和的分選,不會干擾細(xì)胞的分泌活動,保留了細(xì)胞活性。WOLF的體型很小,只有2立方英尺,可以很容易地放入生物安全柜中,確保整個工作流程無菌。可拋棄式分選芯片集成了所有管路,樣本間無任何共用管路,確保工作流程完全沒有交叉污染。
在WOLF上分析并分選抗體分泌細(xì)胞:通過SytoxGreen陽性染色從100%轉(zhuǎn)染的人群中去除死細(xì)胞,其中92.9%為PE陽性抗IgG+的活細(xì)胞(下圖)。
從分選結(jié)果來看,在每個平板中產(chǎn)生抗體的克隆占單細(xì)胞長成孔的73%,73%,63%和71%(下圖左)并從不同轉(zhuǎn)染混合物中分選的單細(xì)胞產(chǎn)生高產(chǎn)克隆(下圖右)。
WOLF能夠準(zhǔn)確地檢測和分選樣本中的抗體分泌細(xì)胞,并且單克隆生長和抗體分泌滴度水平非常高。這種方法可以加速抗體生產(chǎn)過程中新轉(zhuǎn)染產(chǎn)生的高產(chǎn)克隆穩(wěn)定細(xì)胞系的發(fā)展。WOLF的熒光激活細(xì)胞分選能力,溫和的壓力和無菌微流控分選原理,使其成為加速治療性抗體工作流程的有力工具。
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