牛抗體的一個顯著特點(diǎn)是超長的CDR H3區(qū)域，并且有能力進(jìn)入結(jié)構(gòu)復(fù)雜的抗原表位，這在任何其他物種中都沒有觀察到。因此，牛免疫球蛋白作為針對多種抗原的臨床治療和研究工具具有巨大的發(fā)展?jié)摿ΑＨ欢c其他物種不同，在單細(xì)胞水平研究牛免疫球蛋白基因的技術(shù)尚未得到全面開發(fā)。Scripps研究所和應(yīng)用生物醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所的Smider小組利用NanoCellect的新型細(xì)胞分選技術(shù)，建立了一種在單細(xì)胞水平上擴(kuò)增牛免疫球蛋白VH和VL基因的新方法。
他們采用WOLF細(xì)胞分選儀和N1單細(xì)胞分配器將單個B細(xì)胞分選到孔中，用于cDNA 生產(chǎn)和單細(xì)胞(sc) PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行巢式PCR。由于細(xì)胞完整性很高，約有53%的孔同時產(chǎn)生了重鏈和輕鏈的序列。
這是首個全面優(yōu)化單個牛B細(xì)胞抗體基因擴(kuò)增的方案。與傳統(tǒng)的FACS相比，使用WOLF細(xì)胞分選儀進(jìn)行分選后，可檢測到OneStep RT-PCR產(chǎn)物的單細(xì)胞數(shù)量增加了近一倍（下圖B），對重鏈和輕鏈進(jìn)行測序的單細(xì)胞數(shù)量增加了41%（下圖C）。因此，scPCR從分選的B細(xì)胞中擴(kuò)增牛VH和VL鏈基因的最佳條件在很大程度上取決于所用細(xì)胞分選儀器的類型和PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化。這項新技術(shù)能從單個牛B細(xì)胞中產(chǎn)生表達(dá)重鏈和輕鏈對的單克隆抗體，有助于快速鑒定重組牛抗體。人們對牛抗體基因重組知之甚少，而這種方法將能在單細(xì)胞水平上評估牛的重鏈和輕鏈基因重組。
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