圖1 （A）C.NEST培養(yǎng)系統(tǒng)包含四個(gè)獨(dú)立的腔室。（B）C.NEST培養(yǎng)環(huán)境控制。（C）C.NEST支持靜態(tài)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)。（D）C.NEST軟件能同時(shí)控制4臺(tái)儀器。

在制藥工業(yè)，為了提高細(xì)胞培養(yǎng)的通量和效率，微型生物反應(yīng)器一直在不斷發(fā)展。小規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)方式在CLD早期階段和藥物篩選過程的優(yōu)化方面都有很高的價(jià)值。C.NEST作為一款微型生物反應(yīng)器不僅能夠?qū)崿F(xiàn)混合培養(yǎng)，靜態(tài)培養(yǎng)的表現(xiàn)也不輸傳統(tǒng)的培養(yǎng)箱。

在這里，我們用C.NEST培養(yǎng)了不同規(guī)格的細(xì)胞孔板中的細(xì)胞，并與傳統(tǒng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行了比較。C.NEST靜態(tài)培養(yǎng)時(shí)，每個(gè)腔室可以放入兩塊384孔板或兩塊96孔板或一塊24孔板。

圖2 在C.NEST中用不同規(guī)格的細(xì)胞板靜態(tài)培養(yǎng)細(xì)胞。單細(xì)胞種在兩塊384孔板中，靜態(tài)培養(yǎng)10天。2×10⁵/mL CHO-S細(xì)胞種在兩塊96孔板和一塊24孔板中靜態(tài)培養(yǎng)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)都在傳統(tǒng)培養(yǎng)箱中設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)。

下圖顯示了384孔板中的細(xì)胞生長狀態(tài)，可以看到細(xì)胞生長速度與活率與傳統(tǒng)培養(yǎng)箱相比并沒有顯著性差異。

圖3 在 384 孔板中對 C.NEST 與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)箱的單細(xì)胞克隆進(jìn)行比較。（A）通過一系列圖像對每個(gè)單細(xì)胞進(jìn)行監(jiān)測。（B）在顯微鏡下觀察克隆（比例尺 = 1 毫米）。將融合度分為 3 個(gè)等級，并評估每個(gè)等級中克隆的數(shù)量和百分比。（C）每組克隆分布的熱圖。（D 和 E）展示了在第 10 天每個(gè)匯合度等級中活細(xì)胞和細(xì)胞活力的代表性數(shù)據(jù)。（F）由于邊緣效應(yīng)，對外側(cè)孔的細(xì)胞活力進(jìn)行了確認(rèn)。數(shù)據(jù)使用單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行分析，并以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean ± SEM）表示。P 值的顯著性表示為：P≥0.05（無顯著差異，ns），P<0.05（*），P<0.01（**），P<0.001（***），P<0.0001（****）

24孔板和96孔板的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖所示，細(xì)胞各方面表現(xiàn)與傳統(tǒng)培養(yǎng)箱相比也無顯著性差異。

圖4 對比C.NEST和培養(yǎng)箱培養(yǎng)的96孔板和24孔板中的細(xì)胞狀態(tài)。(A-C) 在培養(yǎng)第3天時(shí)，對96孔板培養(yǎng)的總細(xì)胞密度、活細(xì)胞密度和活細(xì)胞率進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析進(jìn)行分析。(D-F) 在培養(yǎng)第3天時(shí)，對24孔板培養(yǎng)的總細(xì)胞密度、活細(xì)胞密度和活細(xì)胞率進(jìn)測量。數(shù)據(jù)采用配對雙尾t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P值的顯著性以P≥0.05(ns)、P<0.05(*)、P<0.01(**)、P<0.001(***)、P<0.0001(****)表示。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，如CHO-S，通常用于生產(chǎn)生物制藥行業(yè)的治療性蛋白質(zhì)。一般來說，治療性蛋白質(zhì)是在高達(dá)2000 L的生物反應(yīng)器中的細(xì)胞分泌，在大規(guī)模培養(yǎng)之前，需要經(jīng)過一個(gè)復(fù)雜的過程來選擇和確認(rèn)高產(chǎn)細(xì)胞系。搖瓶通常應(yīng)用于工藝開發(fā)，但往往占用空間大。微孔板可以解決這些限制，在平行實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行工藝開發(fā)。

在這篇文章中，C.NEST細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)顯示了不同細(xì)胞培養(yǎng)的能力 (圖3和圖4)。因此，在CLD過程中應(yīng)用C.NEST是一個(gè)很好的選擇。我們已經(jīng)證實(shí)，單細(xì)胞可以在C.NEST培養(yǎng)的384孔板中正常生長（圖3），96孔和24孔培養(yǎng)效果良好 (圖4)。表明克隆也可以擴(kuò)大到96孔和24孔板，在同一個(gè)C.NEST室中進(jìn)行靜態(tài)或混合培養(yǎng)。此外，多尺度微孔板可應(yīng)用于多種領(lǐng)域，如384孔板可用于病毒細(xì)胞的篩選融合實(shí)驗(yàn)，96孔板用于藥物發(fā)現(xiàn)中的細(xì)胞球形成，24孔板用于工藝開發(fā)中的培養(yǎng)基篩選。小型化的檢測方法可以減少大規(guī)模試驗(yàn)的耗材成本，被認(rèn)為是在醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)等領(lǐng)域應(yīng)用的一個(gè)趨勢。

同騰睿杰（上海）生物科技有限公司作為 Cytena C.NEST 新一代微型生物反應(yīng)器中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的售前售后服務(wù)。

聯(lián)系電話：021-50826962

聯(lián)系郵箱：sales@ttbiotech.com